大菱鲆蛋白酶体亚基LMP7基因的克隆及表达分析     

张博  王贤丽  宋文平  郑德斌  马超  肖广侠  贾磊 《海洋学报(英文版)》2015,34(1):110-118

  相似文献   

溶藻弧菌dtd基因的克隆及原核表达条件优化     

陈立明  ;庞欢瑛  ;简纪常  ;吴灶和 《广东海洋大学学报》2014,(3):52-57

根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温度、诱导时间、诱导IPTG浓度等条件的优化,最后探究其纯化时最佳咪唑洗脱浓度。结果表明:DTD蛋白成功表达,且其以包涵体的形式存在,在诱导温度37℃、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下诱导5 h表达量最高,纯化最佳咪唑洗脱浓度为150 mmol/L。  相似文献   

仿刺参养殖区泥样中灿烂弧菌拮抗菌的快速筛选及其保护作用     

陈四清  李杰  韩茵  唐磊  白海盟  刘长琳  邹安革  祁自忠 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2014,44(11):30-36

采用不同培养基和泥样加热方法,从红岛仿刺参养殖区泥样中分离出27株可培养细菌,对其进行16SrRNA基因序列分析。发现海泥中可培养细菌多分布于γ-变形菌纲(γ-proteobacteria)(占总菌数的71.4%),其中包括假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、弧菌属(Vibrio)和希瓦氏菌属(Shewanella)等;80℃加热处理20min,海泥中可培养细菌多属于芽孢杆菌属(Bacillus)。人工浸泡感染实验发现,泥样中灿烂弧菌LJ08(Vibrio splendidus)对仿刺参幼参具有致病性。泥样中分离获得的可培养细菌经安全性、抑菌活性和毒性检测,筛选出对灿烂弧菌LJ08有明显抑菌作用的LJ03、LJ04和LJ06并用其进行人工拮抗实验。统计分析显示,添加LJ03和LJ06拮抗组的累计排脏率分别为(36.11±4.81)%和(2.78±4.81)%,与仅添加灿烂弧菌LJ08的阳性对照组差异显著(P0.05)。结果表明,LJ03和LJ06具有很好保护仿刺参幼参的作用,尤其LJ06对仿刺参幼参的排脏保护率达104.7%。作为拮抗灿烂弧菌的潜在有益菌,LJ06在仿刺参养殖中将有良好的应用前景。  相似文献   

Design of Vibrio 16S rRNA Gene Specific Primers and Their Application in the Analysis of Seawater Vibrio Community     

LIU Yong YANG Guanpin WANG Hualei CHEN Jixiang SHI Xianming ZOU Guiwei WEI Qiwei SUN Xiuqin 《中国海洋大学学报(英文版)》2006,5(2):157-164

The pathogenic species of genus Vibrio cause vibriosis, one of the most prevalent diseases of maricultured animals and seafood consumers. Monitoring their kinetics in the chain of seafood production, processing and consumption is of great importance for food and mariculture safety. In order to enrich Vibrio-representing 16S ribosomal RNA gene （rDNA） fragments and identify these bacteria further real-timely and synchronously among bacterial flora in the chain, a pair of primers that selectively amplify Vibrio 16S rDNA fragments were designed with their specificities and coverage testified in the analysis of seawater Vibrio community. The specificities and coverage of two primers, VF169 and VR744, were determined theoretically among bacterial 16S rDNAs available in GenBank by using BLAST program and practically by amplifying Vibrio 16S rDNA fragments from seawater DNA. More than 88.3% of sequences in GenBank, which showed identical matches with VR744, belong to Vibrio genus. A total of 33 clones were randomly selected and sequenced. All of the sequences showed their highest similarities to and clustered around those of diverse known Vibrio species. The primers designed are capable of retrieving a wide range of Vibrio 16S rDNA fragments specifically among bacterial flora in seawater, the most important natural environment of seafood cultivation.  相似文献   

Disease resistance and humoral immunomodulatory effects of vitamin C on grouper,Epinephelus awoara     

Qin Qi-wei  Wu Zao-he  Pan Jin-pei 《中国海洋湖沼学报》2000,18(3):247-252

The disease resistance and humoral immunomodulatory effects of vitamin C administered orally to grouper,Epinephelus awoara maintained on a frozen fish diet supplemented with vitamin C at 500, 1000, 1500 and 2000 mg/kg were investigated. After 20 weeks, the growth rates of the groups with high level of vitamin C apparently increased. The untreated fish had symptoms of vitamin C deficiency. The endogenous liver tissue vitamin C levels were found to reflect well the dietary treatments. After intraperitoneal injection or bath challenge with a virulent strain ofVibrio vulnificus, fish fed with high level vitamin C showed significantly higher survival rate compared with the normal control group. Vaccination with formalin inactivatedV. vulnificus significantly enhanced the specific antibody production in fish treated with vitamin C, and completely protected from strong bacterial challenge the groups fed on fish with vitamin C 1500 and 2000 mg/kg diet. Project 39500113 supported by NSFC and also by Guangdong Science Research Foundation (Grant No. 950711).  相似文献   

6种海洋致病性弧菌36kDa外膜蛋白特性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

唐小千  战文斌  周丽  绳秀珍 《中国海洋大学学报(自然科学版)》2009,39(2)

研究本着筛选和制备弧菌共同外膜蛋白亚单位疫苗,用十二烷基肌氨酸钠抽提并结合超速离心的方法提取了鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、鱼肠道弧菌(V.ichthyoenteri)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)和创伤弧菌(V.vulnificus)6种海洋致病性弧菌的主要外膜蛋白, SDS-PAGE图谱比较发现这6种弧菌都存在36 kDa的外膜蛋白条带.通过电泳洗脱分离纯化这6种弧菌的36 kDa外膜蛋白,并制备了鳗弧菌菌株SJ060621的36 kDa外膜蛋白多抗.ELISA和Western-blot印迹结果显示,仅鳗弧菌SJ060621、S010610-1和哈维氏弧菌的36 kDa外膜蛋白存在免疫交叉反应;双向电泳分析了鳗弧菌SJ060621、S010610-1、哈维氏弧菌和溶藻弧菌的36 kDa外膜蛋白,2-DE图谱显示出鳗弧菌SJ060621和S010610-1均由3种等电点相近的蛋白组成,存在很高的同源性,2株鳗弧菌与溶藻弧菌和哈维氏弧菌在蛋白质组成数量和等电点上都存在较大的差异,结果说明通过主要外膜蛋白的分子量和免疫特性研究,可为筛选不同弧菌共同外膜蛋白的亚单位疫苗提供有利参考.  相似文献   

红鳍东方鲀(Takifugu rubrips)病原杀对虾弧菌的主要生物学特性研究          下载免费PDF全文

秦国民  张晓君  陈翠珍  房海  阎斌伦  徐静 《海洋与湖沼》2008,39(3):228-233

采用表观分类学及分子生物学方法,对从发病的养殖红鳍东方()中分离的细菌进行了主要生物学特性研究.主要包括形态特征、理化特性等较系统的表观分类学指征鉴定;同时对代表菌株进行了16S rRNA基因的分子鉴定,测定了16S rRNA基因序列、分析了相关细菌相应序列的同源性、构建了系统发生树;结果表明,分离菌为弧茵属(Vibrio Pacini 1954)的杀对虾弧菌(Vibrio penaeicidasp.nov.Ishimaru et al 1995).代表菌株(Hc051105-6株)16s rRNA基因序列长度(不包括引物结合区)为1443bp(GenBank登录号:EU073023),代表菌株(HC051105-8株)16S rRNA基因序列长度(不包括 引物结合区)为1450bp(GenBank登录号:Eu073024).择代表菌株做对健康红鳍东方鲀的人工感染试验,认为分离鉴定的杀对虾弧菌在被检红鳍东方鱼电病例具有一定的病原学意义.药敏试验结果显示,对供试37种抗菌药物中,在一些药物中存在耐药性的菌株间差异.  相似文献   

三疣梭子蟹几丁质酶基因(PtCht6)的克隆及其在免疫中的功能分析     

宋柳  吕建建  王磊  孙东方  刘萍 《海洋与湖沼》2019,50(5):1080-1090

几丁质酶(chitinase)在甲壳动物的蜕皮、消化和免疫等很多生物学过程中发挥重要功能,为深入探讨几丁质酶的免疫防御机制,本实验利用RACE技术克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)PtCht6基因。该基因cDNA全长2736bp,开放阅读框(ORF)2103bp,编码700个氨基酸,具有几丁质酶GH18家族典型特征。利用实时荧光定量技术分析PtCht6在三疣梭子蟹不同组织、不同蜕皮阶段、不同病原感染以及低盐胁迫(11)下的表达特征,结果显示:PtCht6在各组织中均有表达且在肝胰腺中的表达量最高;在不同蜕皮时期的肝胰腺中,其表达量由蜕皮后期(A/B)、蜕皮间期(C)、蜕皮前期(D)依次递减(P0.05);人工感染WSSV和副溶血弧菌后.PtCht6的表达量在肝胰腺中分别于12h、72h达到最大值,在血细胞中均于12h达到最大值,且相较于对照组,整体显著上调表达(P0.05);低盐胁迫能够显著抑制该基因的表达,最高抑制73倍(P0.05)。同时发现,低盐环境下感染WSSV后,该基因达到峰值的时间明显延迟(至少延迟12h.P0.05)。该研究结果预示PtCht6作为免疫因子参与三疣梭子蟹的病原防御,且低盐胁迫在一定程度上抑制了该基因的免疫功能。  相似文献   

利用扩增vvhA基因的环介导等温扩增技术快速，特异而敏感地检测创伤弧菌     

张丽娜  王明义  丛殿霞  丁淑研  丛日楠  岳进勇  耿建利  胡成进 《海洋学报(英文版)》2018,37(4):83-88

创伤弧菌是一种可感染人类的河口病原菌。建立快速，特异而敏感的检测方法，有助于创伤弧菌感染的早期疾病诊断和及时治疗。本研究设计了针对vvhA基因的一系列引物（包括两对外部引物和两对内部引物），采用环介导等温扩增技术（LAMP）来检测创伤弧菌。结果显示，本方法的最适扩增温度是63℃，反应仅需35分钟。扩增产物不仅可以用含有DNA ladder的琼脂糖凝胶电泳检出，也可借助钙黄绿素直接肉眼观察。采用45株菌株检测该方法的特异性，其中所有创伤弧菌均被检出而其他菌株检测结果皆为阴性。本方法的敏感性是普通PCR扩增的100倍，同时利用该方法可以准确检测出所有的模拟样品、临床标本及环境样品。与其他已知方法比较，针对vvhA基因的介导等温扩增技术可以快速、简单、敏感及特异地鉴定创伤弧菌。  相似文献   

斑节对虾TSG101基因的克隆及表达分析     

王芳  范嗣刚  赵超  王鹏飞  闫路路  邱丽华  闫喜武 《海洋科学》2019,43(7):122-131

为探究肿瘤易感基因101(简称TSG101)对斑节对虾(Penaeusmonodon)的免疫应答作用,了解在细菌刺激下斑节对虾的机体发生的变化机制,本研究以哈维弧菌(Vibrioharveyi)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)为实验组,以磷酸缓冲液(PBS)为对照组,通过荧光定量分析展开对斑节对虾对菌刺激的免疫应答作用。结果显示,斑节对虾的TSG101在各组织中均有表达,在肝胰腺中的表达量最高。在金黄色葡萄球菌刺激下,斑节对虾的TSG101在肝胰腺中的表达量与对照组相比呈极显著上调(P0.01),第12小时的TSG101 mRNA的表达量达到最大(为对照组的21.60倍);在鳃中的表达量与对照组相比呈极显著上调(P0.01),第6小时斑节对虾TSG101的表达量达到最大值(为对照组的3.64倍)。在注射哈维弧菌第9小时,肝胰腺中的PmTSG101 mRNA表达量极显著上调(P0.01)且达到最大(为对照组的2.50倍)。实验结果初步表明,斑节TSG101参与斑节对虾的先天免疫反应,在金黄色葡萄球菌和哈维弧菌的刺激的情况下,该基因RNA水平的表达情况发生明显变化。  相似文献